簡要描述：NCI-H1299（人非小細胞肺癌細胞）介紹：種屬：人；貼壁生長；生長周期：3~4天組織來源肺癌：非小細胞肺癌；轉移灶：淋巴結生長特性貼壁細胞形態(tài) 上皮細胞樣生長培養(yǎng)基RPMI-1640＋10% FBS＋1% P/S培養(yǎng)條件：氣相：空氣，95%；CO2，5%溫度：37℃
產品型號： YKNCI-H1299
所屬分類：細胞庫
更新時間：2024-04-29
NCI-H1299（人非小細胞肺癌細胞）介紹：
種屬：人；貼壁生長；生長周期：3~4天
培養(yǎng)步驟：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備：
1） 準備基礎培養(yǎng)基( GIBCO，添加NaHCO3 1.5g/L，丙酮酸鈉 0.11g/L)；優(yōu)質胎牛血清，10%。
2） 培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3） 凍存液：90%培養(yǎng)基，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲存。
二． 細胞處理：
1） 復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或將細胞懸液加入10cm皿中，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并檢查細胞密度。
2） NCI-H1299人非小細胞肺癌細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。
對于貼壁細胞，傳代可參考以下方法：
1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
2. 加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3. 按6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4. 將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3）細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時，可進行細胞凍存。貼壁細胞凍存時，棄去培養(yǎng)基后加入少量MY，細胞變圓脫落后，加入約1ml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中，再添加10%DMSO后進行凍存。
NCI-H1299（人非小細胞肺癌細胞）注意事項：
1.收到細胞后先觀察細胞瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象，若有上述現(xiàn)象發(fā)生請及時和我們聯(lián)系。
2.先不開瓶蓋，瓶身擦拭酒精后放在培養(yǎng)箱靜置數(shù)小時（4h左右），穩(wěn)定細胞狀態(tài)，切忌在溫箱內靜置過夜。
3.靜置后鏡檢，拍照，記錄細胞狀態(tài)。建議傳代后也拍照記錄細胞生長情況。
4.懸浮細胞：將細胞瓶內液體都轉移至無菌離心管內，1000 轉/分鐘離心5min，培養(yǎng)基上清可備用，管底細胞沉淀用培養(yǎng)基重懸。鏡檢時若細胞密度超過80%，可將細胞懸液分至2個細胞瓶內培養(yǎng)；若密度未超過80%，細胞懸液移至原瓶繼續(xù)培養(yǎng)，待達到80%時再正常傳代。備注：聚團生長慢，有密度依賴，必須使用T25培養(yǎng)瓶豎立培養(yǎng)，3天一次半量換液一次，1-2周傳代一次。
貼壁細胞：若細胞密度超過80%，可正常傳代；若未超過80%，收集細胞瓶內的培養(yǎng)基，留8ml繼續(xù)培養(yǎng)至80%左右再傳代，瓶蓋可稍微擰松。備注：細胞貼壁慢，傳代后細胞放2天不動。
5.細胞瓶內的培養(yǎng)基含血清和雙抗，可收集后4℃保存?zhèn)溆?，可補加2%血清。剛開始傳代時建議一半用細胞瓶內的培養(yǎng)基，一半用客戶自備的培養(yǎng)基，使細胞逐漸適應培養(yǎng)條件，以免因不適應而造成生長狀態(tài)不佳。
